滄州市分子診斷試劑原材料標準
發(fā)布時間：2023-01-31 01:34:32
滄州市分子診斷試劑原材料標準
化驗室診斷方法- -般采用的檢測依據(jù)為國家標準、農(nóng)業(yè)標準，其次是有關動物疫病檢測的其它技術規(guī)程、規(guī)范等，還可以采用化驗室自行設定的檢測方法。應結(jié)合化驗室條件及樣品類型等因素來選擇合適的方法。例如，化驗室需診斷偽狂犬病，如果沒有基因擴增儀，但有酶標儀，就可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷，而不必用聚合酶鏈反應試驗診斷。使用化驗室自行設定的檢驗方法要慎重,因為，一該檢驗方法是否正確有待驗證;二如果將來有爭議.上訴法院，會有較大的麻煩。
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熱啟動通過抑 制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR 儀達到變性溫度。延緩加入Taq DNA 聚合酶的手工熱啟動方法十分煩瑣，尤其是對高通量應用。其他熱啟動方法使用蠟防護層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩沖液等) 隔離開。在熱循環(huán)時，蠟熔化把各種成分釋放出來并混在一起。蠟防護層法同樣比較煩瑣，易于污染，不適用于高通量應用。
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隨著對動物檢疫工作的發(fā)展與完善,僅依靠獸醫(yī)的經(jīng)驗檢查已經(jīng)不能滿足現(xiàn)今動物疫病診斷的需求,因此,病理化驗室開始發(fā)揮重要作用.如藍耳病的病原學檢測方式需要采集病豬的扁桃體,淋巴結(jié),肺,肝,脾等,利用10%的中性福爾馬林進行固定,經(jīng)過石蠟切片,HE染色之后使用光鏡對樣本進行病理學組織檢查得出結(jié)論,又如豬瘟的病理學檢查方式主要有免疫熒光實驗,酶聯(lián)免疫吸附實驗,核酸探針技術,基因芯片檢測技術等.
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應溫度高達75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當提高，這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應的特異性。
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在動物疫病診斷中，化驗室的操作較為關鍵，對診斷的結(jié)果有直接的影響。但是，在當前實驗室操作中還存在一-些問題，如檢測操作中、檢測報告中未填寫、不開具《檢測委托書》等這些問題的存在嚴重影響動物疫病的診斷，不利于動物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要對相關工作制度進行不斷地完善，促使化驗室的操作更加規(guī)范化、科學化;加強對實驗室人員的專業(yè)培訓，提高其操作水平。只有這樣才能提高動物疫病檢測的準確性，為我國的動物疫病防控工作做好鋪墊。
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熱啟動酶是耐高溫的依賴于DNA模板的DNA聚合酶，來源于嗜熱的嗜熱水生菌Thermus aquaticus YT一1，一般應用于PCR反應。TaqDNA聚合酶是一種M92+依賴酶，反應體系中須有Mg2+存在，然而保持適當?shù)腗g2+濃度十分重要，因為Mg2+濃度過高或過低均會影響引物與模板的結(jié)合、模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度、引物二聚體的形成以及酶的活性與精 確性。