伊春市實時熒光定量PCR儀標準
發(fā)布時間:2022-12-10 01:35:18
伊春市實時熒光定量PCR儀標準
化驗室診斷方法采用的檢測依據有以下幾種:①國家標準以及農業(yè)標準;②動物疫病檢測的其他規(guī)范:③化驗室自行設定的檢測方法。不管采用何種方法,都需要考慮化驗室自身的條件及樣品類型,如在對偽狂犬病進行診斷時,實驗室有酶標儀,沒有基因擴增儀,在診斷時檢測人員可采用酶聯免疫吸附試驗進行診斷。如果送檢樣品為血清,檢測人員則可以采用酶聯吸附試驗,而不需要采用動物接種試驗與病毒分離鑒定方法。

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分子診斷主要是應用分子生物學方法檢測生物體內遺傳物質的結構或表達水平的變化而做出診斷的技術。由于分子診斷可以從基因層次進行檢測,因此檢測靈敏度和準確性的優(yōu)勢較為明顯,可在感染初期識別病毒或者提早確認基因缺陷,從而提供個性化的醫(yī)療診斷服務,主要應用于遺傳病、傳染性疾病、腫瘤等疾病的檢測與診斷。分子診斷主要包括 核酸診斷 和 生物芯片技術 。

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動物疫病診斷的主要內容有:一是對血、 尿、糞等進行臨床常規(guī)化驗;二是從流行病學角度,調查研究動物疫病流行情況,主要調查動物發(fā)病時間及地點、疫病蔓延情況、疫情來源及傳播的途徑與方式等;三是從病理學方面,剖檢因忠傳染病而死亡的畜禽尸體,查看其病理變化,或者取病料進行送檢,再進一步做病理組織學方面的診斷;四是從微生物學角度,檢查、堅定從患病的畜禽病料當中分離并且培養(yǎng)出來的病原微生物,或者是進行動物接種試驗等,五是從免疫學角度,對組織或者細胞的變態(tài)反應、細胞的免疫功能及血清學反應等進行診斷。

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PCR產品占據分子診斷的主要市場,基因芯片是分子診斷市場發(fā)展的主要趨勢。PCR產品靈敏度高、特異性強、診斷窗口期短,可進行定性、定量檢測,可廣泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等,填補了早期免疫檢測窗口期的檢測空白,為早期診斷、早期治療、安 全用血提供了有效的幫助?;蛐酒欠肿由飳W、微電子、計算機等多學科結合的結晶,綜合了多種現代高精尖技術,被專家譽為診斷行業(yè)產品。但其成本高、開發(fā)難度大,產品種類很少,只用于科研和藥物篩選等用途。

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在動物疫病診斷標準等技術規(guī)范中,酶聯免疫吸附試驗對試驗中加底物的反應步驟進行規(guī)定,規(guī)定固定的時間,然后加終止液。但是,在許多酶聯免疫吸附試驗中,加底物的反應步驟需要根據陰性、陽性對照反應情況對反應的時間進行調整。如當陰性與陽性對照的反應結果出現后,實驗人員則可以加終止液。有關資料規(guī)定的時間可能太長或者太短,這樣會對反應的結果產生影響。如果加底物的反應時間較長,樣品則有可能呈現陽性,易導致誤診情況的產生。

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Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強,PCR擴增的指數增長期越長,‘S型’曲線更加典型,熒光信號值更高,而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶,在國外品牌中,英國Bioline公司的熱啟動Taq酶,酶動力較好,可做4重PCR,等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中,BIOG熱啟動Taq酶的指數期較長,可做3重PCR,且擴增曲線的‘S’型不受影響,其它的國產品牌一般只能支持2重反應,在做3重反應時,擴增曲線低矮,熒光信號值較低,無典型擴增曲線,結果很難判定。