蘇州市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀廠家
發(fā)布時(shí)間：2023-04-10 01:30:24
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分子診斷是當(dāng)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要前沿領(lǐng)域之一，其核心技術(shù)是基因診斷，常規(guī)技術(shù)包括：（1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）；（4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）；（7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。
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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補(bǔ)序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對(duì)特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(yīng)（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng)，擴(kuò)增出所需目的DNA。包括三個(gè)基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(duì)（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測定、基因表達(dá)譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴(kuò)展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢(shì)。
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Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號(hào)值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們?cè)容^過多家公司的熱啟動(dòng)Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶，酶動(dòng)力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值高。在國內(nèi)品牌中，BIOG熱啟動(dòng)Taq酶的指數(shù)期較長，可做3重PCR，且擴(kuò)增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時(shí)，擴(kuò)增曲線低矮，熒光信號(hào)值較低，無典型擴(kuò)增曲線，結(jié)果很難判定。
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熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。
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分子診斷儀器主要包括核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀和基因測序儀等。在技術(shù)相對(duì)容易攻破的中端儀器領(lǐng)域，如核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀國產(chǎn)化已經(jīng)成型，國產(chǎn)產(chǎn)品占據(jù)了主要市場，而 基因測序儀的國產(chǎn)化進(jìn)程正在發(fā)起突圍，主要表現(xiàn)為三種方式： （1）并購國外的測序儀公司，在其核心技術(shù)的基礎(chǔ)上推出自主品牌的測序儀，以華大基因?yàn)榇?。?）利用內(nèi)生科研能力自主研發(fā)，以華因康基因、紫鑫藥業(yè)等公司為代表。（3）與國外知名測序儀生產(chǎn)企業(yè)合作，在其測序儀原型的基礎(chǔ)上加以改造，形成具有特殊用途的自主品牌的測序儀，代表公司是貝瑞和康、達(dá)安基因和博奧生物等。